Проанализированы способность ооцитов человека к оплодотворению и последующее развитие эмбрионов в культуре в зависимости от реакции яичника на стимуляцию кломифенцитратом и человеческим менопаузальным гонадотропином с последующей индукцией овуляции хорионическим гонадотропином.Особенности оплодотворения ооцитов и развития эмбрионов в культуре в зависимости от реакции яичников на стимуляцию суперовуляции О.А. Воробьева, В.В. Потин, В.С. Корсак, А.А. Кирсанов, В.В. Козлов Международный центр репродуктивной медицины, НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт-Петербург; Чикагский институт репродуктивной генетики Проблемы репродукции, N5-1998, с.53-58 Проанализированы способность ооцитов человека к оплодотворению и последующее развитие эмбрионов в культуре в зависимости от реакции яичника на стимуляцию кломифенцитратом и человеческим менопаузальным гонадотропином с последующей индукцией овуляции хорионическим гонадотропином. По мере усиления ответа яичника на стимуляцию и повышения числа пунктированных фолликулов происходит постепенное снижение частоты оплодотворения ооцитов в культуре и повышение частоты формирования полиплоидных зигот. Определена нелинейная зависимость частоты оплодотворения, а также образования полиплоидных зигот от числа фолликулов. С усилением ответа яичника на стимуляцию наблюдается улучшение морфологических характеристик и увеличение числа бластомеров у эмбрионов.Ключевые слова: стимуляция суперовуляции, пункция фолликулов, частота оплодотворения, формирование зигот, эмбрион.  Одним из основных условий успешного лечения бесплодия методом оплодотворения ооцитов в культуре и последующего переноса эмбрионов в полость матки (in vitro fertilization — IVF, метод экстракорпорального оплодотворения — ЭКО) является оптимальная стимуляция процессов фолликулогенеза, суперовуляции и рецептивности эндометрия [1]. Ранее было показано, что ответ яичников на стимуляцию может зависеть как от возраста женщины, так и от наличия овариальной недостаточности [2, 3].  Данные литературы о влиянии ответа яичника на процессы оплодотворения и последующего развития достаточно противоречивы. По мере увеличения числа фолликулов в яичнике в ответ на стимуляцию наблюдали снижение частоты оплодотворения ооцитов [4]. В то же время другие авторы [5] (1996) отмечали повышение доли оплодотворенных ооцитов при увеличении числа пунктированных фолликулов.  В настоящей работе изучена зависимость между числом пунктированных фолликулов и такими показателями, как частота оплодотворения ооцитов, формирования диплоидных и полиплоидных зигот, а также развитием эмбрионов в культуре.Материал и методыПроанализированы исходы 1146 пункций фолликулов, в результате которых были получены ооциты у женщин, проходивших ЭКО в Центре ЭКО Научно-исследовательского института акушерства и гинекологии им.  Д.О. Отта РАМН. У всех больных показанием к проведению ЭКО явилось трубно-перитонеальное бесплодие вследствие непроходимости или отсутствия маточных труб. Возраст больных колебался от 19 до 46 лет и составлял в среднем 31,3 0,1 года. Для стимуляции суперовуляции использовали кломифенцитрат (клостилбегит) и человеческий менопаузальный гонадотропин (хумегон, пергонал). Для индукции овуляции вводили хорионический гонадотропин (ХГ) при достижении лидирующими фолликулами диаметра 17-18 мм.  В среднем у одной женщины было пунктировано 7,83 0,13 фолликула и при этом получено 5,63 0,09 ооцита. Ооциты отмывали и культивировали в среде Ham-F10 с альбумином человека в течение 6 ч. Для инсеминации вводили 100 000 сперматозоидов в 1 мл среды. Через 18 ч определяли число пронуклеусов в зиготах, при этом полиплоиды удаляли, а нормальные зиготы переносили в свежую среду. Через 24 ч с момента начала наблюдения за зиготой эмбрионы анализировали под микроскопом и определяли число бластомеров и степень выраженности процесса фрагментации бластомеров. Выделяли три основные типа эмбрионов — эмбрионы, имеющие бластомеры без фрагментации, а также эмбрионы с легкой и тяжелой степенью фрагментации цитоплазмы. Индекс фрагментации у эмбрионов первой группы был обозначен цифрой 3, у второй — цифрой 2 и у третьей- цифрой 1. Вторая оценка эмбрионов происходила перед переносом их в полость матки через 72 ч с момента выделения ооцитов из фолликулов. Для переноса отбирали четыре эмбриона с наибольшим числом бластомеров и наименьшей степенью фрагментации цитоплазмы. В среднем при оплодотворении в культуре было получено 3,52 0,68 эмбриона в расчете на одну пункцию и перенесено в полость матки 2,72 0,03 эмбриона.  Частоту оплодотворения вычисляли как отношение числа зигот к общему числу оплодотворенных клеток. Этот показатель в среднем составил 70,43 0,73%. Частоту дробления зигот определяли как отношение числа эмбрионов к общему числу полученных зигот. В среднем эта величина составила 94,38 0,41%. Частоту встречаемости полиплоидных зигот вычисляли по отношению числа полиплоидных зигот к общему числу ооцитов. Среднее значение этого показателя составило 5,11 0,32%.  Для анализа полученных результатов использовали методы вариационного, дисперсионного, корреляционного и регрессионного (линейного, а также множественного) анализа.РезультатыС помощью регрессионного метода проанализированы результаты 1146 пункций. Показано, что с увеличением числа пунктированных фолликулов наблюдалось достоверное снижение таких показателей, как частота оплодотворения (r =-0,21; р<0,0001) и развития зигот (r=-0,12; р<0,0001), и повышалась частота образования полиплоидных зигот в культуре (r=0,48; р<0,0001).С использованием регрессионного анализа нами установлено, что зависимость частоты оплодотворения от числа фолликулов может быть охарактеризована кривой 1 на рис. 1 и формулой:А = 83,64 — 1,42 х N, где А — частота оплодотворения ооцитов, %; N — число пунктированных фолликулов.Рис. 1. Зависимость частоты оплодотворения от числа пунктированных фолликулов.1 —   анализ результатов 1146 пункций; 2 — анализ результатов пункций у женщин в возрасте до 39 лет и нормальными показателями спермограммы мужа. Зависимость частоты оплодотворения в культуре от числа пунктированных фолликулов была изучена также в группе пациенток в возрасте от 20 до 39 лет с нормальными показателями спермограммы у мужа по результатам 759 пункций. В этой группе зависимость частоты оплодотворения от числа пунктированных фолликулов характеризуется кривой 2 на рис. 1 и формулой:А = 94,69 — 10,69 х lnN, где A — частота оплодотворения ооцитов, %, N — число пунктированных фолликулов (от 1 до 20).По мере увеличения числа пунктированных фолликулов происходило закономерное снижение частоты оплодотворения в культуре (табл. 1).Таблица 1. Влияние числа пунктированных фолликулов на частоту оплодотворения ооцитовПоказательЧисло фолликулов1-45-78-1011-15>15Результаты анализа у пациенток в возрасте 20-39 лет при нормоспермии мужаЧисло пункций18325020611344Частота оплодотворения, %81,36 1,791,2,3,473,06 1,411,5,667,55 1,712,564,65 1,893,666,65 3,114 Результаты анализа 1146 пункций Число пункций27437026716768 Частота оплодотворения, %80,03 1,551,2,3,470,52 1,261,5,667,08 1,51263,65 1,673,562,47 2,594,6 Примечание. 1-1, 2-2, 3-3, 4-4, 7-7 — p<0,001; 5-5, 6-6, 8-8, 9-9, 11-11 — p<0,01; 10-10 — p<0,05.Нами проанализирована взаимосвязь числа пунктированных фолликулов и частоты формирования полиплоидных зигот. Количественные данные, характеризующие частоту полиплоидии при различных значениях числа пунктированных фолликулов у нескольких групп пациенток, приведены в табл. 2. Максимальная частота образования полиплоидных зигот наблюдалась при пункции более 15 фолликулов. С уменьшением числа пунктированных фолликулов доля полиплоидных зигот постепенно снижалась.Таблица 2. Влияние числа пунктированных фолликулов на частоту образования полиплоидных зигот и развития диплоидных зиготПоказательЧисло фолликулов1-45-78-1011-15>15Результаты анализа у пациенток в возрасте 20-39 лет при нормоспермии мужаЧисло пункций18325020611344Частота полиплоидии, %4,92 1,014,83 0,636,34 0,775,68 0,817,00 1,40 Частота развития зигот, %97,16 1,081,2,394,81 0,772,492,95 1,07192,37 1,41390,70 1,844 Результаты анализа 1146 пункций Число пункций27437026716768 Частота полиплоидии, %4,64 0,8154,54 0,515,95 0,665,24 0,6656,52 1,08 Частота развития зигот, %96,87 0,876,794,90 0,668,993,44 0,91692,37 1,10890,53 1,637,9 Примечание. 1-1, 7-7 — p<0,001; 2-2, 3-3, 5-5, 6-6, 9-9 — p<0,01; 4-4, 8-8 — p<0,05.С помощью регрессионного анализа показано, что зависимость частоты полиплоидии от числа пунктированных фолликулов имеет нелинейный характер и может быть охарактеризована следующей формулой и графическим изображением (рис. 2):Р = 6,12 — 5,58 : N,где Р — частота образования полиплоидных зигот, %; N — число пунктированных фолликулов.Рис. 2. Зависимость частоты полиплоидии от количества полученных фолликулов.При усилении ответа яичника на стимуляцию наблюдается некоторое повышение частоты блокирования развития на стадии зиготы.  Максимальная (96,9%) частота развития зигот наблюдалась в группе со слабым ответом, а минимальная (90,5%) — в группе женщин с 15 фолликулами и более.Copyright © 2000-2002, РОО «Мир Науки и Культуры». ISSN 1684-9876