Забор и вид материала. Методы идентификации вирусов в практике гинеколога.
Введение.
Мне, врачу гинекологу очень часто приходится сталкиваться с диагностикой вирусных инфекций. Большое количество заболеваний в гинекологии развиваются по причине инфицирования вирусом папилломы человека. Вирус папилломы человека (ВПЧ) насчитывает большое количество видов –более 20. Способ поражения: проникая в слой кожи или слизистой оболочки, вирус встраивается в ДНК клетки кожи, тем самым способствуя нетипичному разрастанию пораженных клеток. Количество зараженных людей исчисляется 60-70% от общего числа населения (статистика ВОЗ).
В этой статье мы подробно разберем забор и вид материала для диагностики не только ВПЧ? но и других вирусов человека. Методы идентификации вирусов, а также их транспортировку.
Забор и вид материала.
1. Время забора: забор материала проводить в остром периоде инфекции, а в случае серологических исследований после 2-4 нед. (с целью выявления динамики изменений концентрации антител).
2. Вид, метод забора и транспортировки материала: зависит от клинической формы инфекции, этиологического фактора и использованного диагностического метода.
*Методы идентификации вирусов. *
1. Электронная микроскопия: позволяет непосредственно выявлять частицы вируса во взятом материале (напр.,кал); модификацией метода исследования, которая увеличивает его чувствительность, является иммуномикроскопия. Доступна только в ограниченном количестве лабораторий и в специализированных центрах. Забор и транспортировка материала ? см. ниже.
2. Культивирование: позволяет увеличить количество и подтвердить присутствие вирусов во взятом образце (мазки берут на транспортную систему со средой для культивации клеток [раствор Хэнкса] или 0,9% NaCl, жидкость из пузырьков на коже — в закрытом капилляре, образцы тканей, соскобы — в сухих пробирках, спинномозговую жидкость, смывы, полученные с использованием раствора Хэнкса, кал, цельная кровь, взятая с гепарином, моча). Вирус размножают в соответствующих клеточных (тканевых) культурах или в куриных эмбрионах (напр., вирус гриппа), а затем идентифицируют на основе цитопатического эффекта или с использованием специфических антител или молекулярными методами. Забор материала осуществляйте в чистый, стерильный резервуар без консервантов, который плотно закрывается. Использование транспортных сред для культивации бактерий может сделать невозможным выделение вирусов. Образцы тканей поместите в небольшом количестве 0,9% NaCl или раствора Хэнкса. Пересылайте материал в лабораторию при темп. 2-4°C; перед культивацией материал можно хранить <12-24 ч при темп. 4°C. Если нет возможности транспортировать материал в лабораторию в течение 24 ч, в некоторых случаях его можно заморозить и транспортировать в лабораторию в условиях, которые делают невозможным размораживание (согласуйте такую тактику с персоналом лаборатории).
3. Серологические методы: в клинической практике играют основную роль в вирусологической диагностике. Позволяют выявлять специфические антитела классов IgM и IgG в сыворотке и подтвердить сероконверсию или повышение их уровня. Материал:
1) сыворотка (1-2 мл) - без гемолиза, сделайте стерильный забор в плотно закрытую пробирку; до 48 ч от забора храните и перевозите материал в условиях холода (5±3°С); если это невозможно ? перешлите как можно быстрее при комнатной темп. (21±4°С). Если образец будет храниться >48 ч ? заморозьте его; транспортировать в условиях, которые делают невозможным размораживания;
2) цельная кровь (5 мл) — сделайте забор «на сгусток» в стерильную пробирку; пробирку нужно транспортировать в лабораторию в течение 2 ч от забора крови;
3) спинномозговая жидкость (1 мл) — сделайте стерильный забор в плотно закрытую пробирку; правила хранения и транспортировки ? как в случае сыворотки (см. выше). Определение специфических антител в спинномозговой жидкости всегда нужно проводить параллельно с их определением в сыворотке, взятой в это же время.
4. Выявление вирусных антигенов (имунофлюорисцентний метод [IFA], EIA, ELISA, латекс-агглютинация [LAT], RIA):
1) мазок или смывы из носоглотки (с целью идентификации вирусов дыхательной системы, кори и т.п.) — сделайте забор стерильным тампоном, увлажненным 0,9% NaCl или раствором Хэнкса, далее разместите тампон в плотно закрытой стерильной пробирке с 1-1,5 мл раствора Хэнкса. Кончик тампона не может быть сухим. Материал доставьте в лабораторию сразу после забора. В случае идентификации вирусов дыхательной системы материалом для исследования также могут быть приготовленные и переданные в лабораторию фиксированные ацетоном препараты для микроскопии;
2) цельная кровь — наберите 6-10 мл в стерильную пробирку с антикоагулянтом и немедленно отправьте в лабораторию;
3) моча — наберите 10-50 мл в стерильный резервуар и отправьте в лабораторию сразу после забора;
4) кал ? хранение и транспортировки как при культивации;
5) биоптат тканей — сразу после получения поместите образец ткани в стерильный стекляный резервуар, между тампонами, увлажненными 0,9% NaCl. Доставьте как можно быстрее в лабораторию (<3 ч от забора), до момента транспортировки храните в холодильнике (8-12°С).
5. Молекулярные методы (выявляют геном вируса или его специфические фрагменты): возьмите материал в стерильные плотно закрытые пробирки или резервуары. Вид материала:
1) цельная кровь (3 мл) - сделайте забор с антикоагулянтом (лучше ЭДТА, не используйте гепарин, - является неспецифическим ингибитором PCR); если образец будет доставлен в лабораторию в течение 24 ч, то может транспортироваться при комнатной температуре (21±4°C), если позже (до 5 дней), рекомендуется хранение и транспортировка в холодильнике при темп. (5±3°С);
2) спинномозговая жидкость (1-2 мл) - после забора как можно быстрее доставьте образец в лабораторию, лучше - в холодильнике при темп. (5±3°С). Если его невозможно доставить в лабораторию в течение 24 ч ? заморозьте его; транспортировка должна происходить в условиях, которые делают невозможным размораживание;
3) сыворотка (2-3 мл) - кровь нужно отцентрифугировать как можно быстрее после забора, а сыворотку немедленно отправить в лабораторию (? спинномозговая жидкость). Если не можете доставить сыворотку сразу после забора ? действуйте аналогично, как со спинномозговой жидкостью;
4) моча сделайте забор с первой струи >2 ч после последнего мочеиспускания (лучше — утром). Образец доставьте в лабораторию так быстро, насколько это возможно (до нескольких часов можно транспортировать при комнатной темп., если дольше ? разместите при темп. 5±3°С и доставьте так быстро, как это возможно);
5) биоптат тканей (?0,2 г) — выполните забор в стерильные пробирки или в резервуар со стерильным 0,9% NaCl; хранения и транспортировка ? как моча. При необходимости пролонгированного хранения ? как спинномозговая жидкость;
6) бронхо-альвеолярные смывы (1-2 мл с БАЛ) — хранение и транспортировка ? как сыворотка.
Искренне ваша, *врач акушер гинеколог Алашеева Маргарита Николаевна