Диагностика вирусных инфекций в практике гинеколога……..

Забор и вид материала. Методы идентификации вирусов в практике гинеколога.
Введение.
Мне, врачу гинекологу очень часто приходится сталкиваться с диагностикой вирусных инфекций. Большое количество заболеваний в гинекологии развиваются по причине инфицирования вирусом папилломы человека. Вирус папилломы человека (ВПЧ) насчитывает большое количество видов –более 20. Способ поражения: проникая в слой кожи или слизистой оболочки, вирус встраивается в ДНК клетки кожи, тем самым способствуя нетипичному разрастанию пораженных клеток. Количество зараженных людей исчисляется 60-70% от общего числа населения (статистика ВОЗ).
В этой статье мы подробно разберем забор и вид материала для диагностики не только ВПЧ? но и других вирусов человека. Методы идентификации вирусов, а также их транспортировку.
Забор и вид материала.
1. Время забора: забор материала проводить в остром периоде инфекции, а в случае серологических исследований после 2-4 нед. (с целью выявления динамики изменений концентрации антител).
2. Вид, метод забора и транспортировки материала: зависит от клинической формы инфекции, этиологического фактора и использованного диагностического метода.

*Методы идентификации вирусов. *
1. Электронная микроскопия: позволяет непосредственно выявлять частицы вируса во взятом материале (напр.,кал); модификацией метода исследования, которая увеличивает его чувствительность, является иммуномикроскопия. Доступна только в ограниченном количестве лабораторий и в специализированных центрах. Забор и транспортировка материала ? см. ниже.
2. Культивирование: позволяет увеличить количество и подтвердить присутствие вирусов во взятом образце (мазки берут на транспортную систему со средой для культивации клеток [раствор Хэнкса] или 0,9% NaCl, жидкость из пузырьков на коже — в закрытом капилляре, образцы тканей, соскобы — в сухих пробирках, спинномозговую жидкость, смывы, полученные с использованием раствора Хэнкса, кал, цельная кровь, взятая с гепарином, моча). Вирус размножают в соответствующих клеточных (тканевых) культурах или в куриных эмбрионах (напр., вирус гриппа), а затем идентифицируют на основе цитопатического эффекта или с использованием специфических антител или молекулярными методами. Забор материала осуществляйте в чистый, стерильный резервуар без консервантов, который плотно закрывается. Использование транспортных сред для культивации бактерий может сделать невозможным выделение вирусов. Образцы тканей поместите в небольшом количестве 0,9% NaCl или раствора Хэнкса. Пересылайте материал в лабораторию при темп. 2-4°C; перед культивацией материал можно хранить <12-24 ч при темп. 4°C. Если нет возможности транспортировать материал в лабораторию в течение 24 ч, в некоторых случаях его можно заморозить и транспортировать в лабораторию в условиях, которые делают невозможным размораживание (согласуйте такую тактику с персоналом лаборатории). 3. Серологические методы: в клинической практике играют основную роль в вирусологической диагностике. Позволяют выявлять специфические антитела классов IgM и IgG в сыворотке и подтвердить сероконверсию или повышение их уровня. Материал: 1) сыворотка (1-2 мл) - без гемолиза, сделайте стерильный забор в плотно закрытую пробирку; до 48 ч от забора храните и перевозите материал в условиях холода (5±3°С); если это невозможно ? перешлите как можно быстрее при комнатной темп. (21±4°С). Если образец будет храниться >48 ч ? заморозьте его; транспортировать в условиях, которые делают невозможным размораживания;
2) цельная кровь (5 мл) — сделайте забор «на сгусток» в стерильную пробирку; пробирку нужно транспортировать в лабораторию в течение 2 ч от забора крови;
3) спинномозговая жидкость (1 мл) — сделайте стерильный забор в плотно закрытую пробирку; правила хранения и транспортировки ? как в случае сыворотки (см. выше). Определение специфических антител в спинномозговой жидкости всегда нужно проводить параллельно с их определением в сыворотке, взятой в это же время.

4. Выявление вирусных антигенов (имунофлюорисцентний метод [IFA], EIA, ELISA, латекс-агглютинация [LAT], RIA):

1) мазок или смывы из носоглотки (с целью идентификации вирусов дыхательной системы, кори и т.п.) — сделайте забор стерильным тампоном, увлажненным 0,9% NaCl или раствором Хэнкса, далее разместите тампон в плотно закрытой стерильной пробирке с 1-1,5 мл раствора Хэнкса. Кончик тампона не может быть сухим. Материал доставьте в лабораторию сразу после забора. В случае идентификации вирусов дыхательной системы материалом для исследования также могут быть приготовленные и переданные в лабораторию фиксированные ацетоном препараты для микроскопии;
2) цельная кровь — наберите 6-10 мл в стерильную пробирку с антикоагулянтом и немедленно отправьте в лабораторию;
3) моча — наберите 10-50 мл в стерильный резервуар и отправьте в лабораторию сразу после забора;
4) кал ? хранение и транспортировки как при культивации;
5) биоптат тканей — сразу после получения поместите образец ткани в стерильный стекляный резервуар, между тампонами, увлажненными 0,9% NaCl. Доставьте как можно быстрее в лабораторию (<3 ч от забора), до момента транспортировки храните в холодильнике (8-12°С). 5. Молекулярные методы (выявляют геном вируса или его специфические фрагменты): возьмите материал в стерильные плотно закрытые пробирки или резервуары. Вид материала: 1) цельная кровь (3 мл) - сделайте забор с антикоагулянтом (лучше ЭДТА, не используйте гепарин, - является неспецифическим ингибитором PCR); если образец будет доставлен в лабораторию в течение 24 ч, то может транспортироваться при комнатной температуре (21±4°C), если позже (до 5 дней), рекомендуется хранение и транспортировка в холодильнике при темп. (5±3°С); 2) спинномозговая жидкость (1-2 мл) - после забора как можно быстрее доставьте образец в лабораторию, лучше - в холодильнике при темп. (5±3°С). Если его невозможно доставить в лабораторию в течение 24 ч ? заморозьте его; транспортировка должна происходить в условиях, которые делают невозможным размораживание; 3) сыворотка (2-3 мл) - кровь нужно отцентрифугировать как можно быстрее после забора, а сыворотку немедленно отправить в лабораторию (? спинномозговая жидкость). Если не можете доставить сыворотку сразу после забора ? действуйте аналогично, как со спинномозговой жидкостью; 4) моча сделайте забор с первой струи >2 ч после последнего мочеиспускания (лучше — утром). Образец доставьте в лабораторию так быстро, насколько это возможно (до нескольких часов можно транспортировать при комнатной темп., если дольше ? разместите при темп. 5±3°С и доставьте так быстро, как это возможно);
5) биоптат тканей (?0,2 г) — выполните забор в стерильные пробирки или в резервуар со стерильным 0,9% NaCl; хранения и транспортировка ? как моча. При необходимости пролонгированного хранения ? как спинномозговая жидкость;
6) бронхо-альвеолярные смывы (1-2 мл с БАЛ) — хранение и транспортировка ? как сыворотка.

Искренне ваша, *врач акушер гинеколог Алашеева Маргарита Николаевна
*

Tags:

Комментариев пока нет.

Добавить комментарий


Беркегейм Михаил

About Беркегейм Михаил

Я родился 23 ноября 1945 года в Москве. Учился в школе 612. до 8 класса. Мама учитель химии. Папа инженер. Я очень увлекался химией и радиоэлектроникой. Из химии меня очень увлекала пиротехника. После взрыва нескольких помоек , я уже был на учете в детской комнате милиции. У меня была кличка Миша – химик. Из за этого после 8 класса дед отвел меня в 19 мед училище. Где меня не знали. Мой отчим был известный врач гинеколог. В 1968 году я поступил на вечерний факультет медицинского института. Мой отчим определил мою профессию. Но увлечение электроникой не прошло, и я получил вторую специальность по электронике. Когда я стал работать врачом гинекологом в медицинском центре «Брак и Семья» в 1980 году, я понял., что важнейшим моментом в лечении бесплодия является совмещение по времени секса и овуляции. Мне было известно, что овуляция может быть в любое время и несколько раз в месяц. И самое главное, что часто бывают все признаки овуляции. Но ее не происходит. Это называется псевдоовуляция. Меня посетила идея создать прибор надежно определяющий овуляцию. На это ушло около 20 лет. Две мои жены меня не поняли. Я мало времени уделял семье. Третья жена уже терпит 18 лет. В итоге прибор получился. Этот прибор помог вылечить бесплодие у очень многих женщин…
×
Записаться на приём или задать вопрос