По Н. Pertoft, 2000 год, журнал «J. Biochem. Biophis. Mtthods 44 (1-30)
Смешать 90 мл Перколя с 10 мл 99 среды, это будет маточный раствор и называется 100%
Перколем. Наслоить 10 мл этого раствора на дно 50 мл пробирки Фалкона.
Разбавить 100% Перколь средой 99 до 50% и 25% концентрации.
Наклонить пробирку под углом 45° и поместить 10 мл пипетку в отверстие пробирки и
медленно отобрать первые 10 мл 50% раствора и проделать такую же операцию с
раствором 25% концентрации, поместив их в цетрифужную пробирку.
Наконец добавить 1 -2 мл спермы наверх градиента.
Слой градиента маркируют бусинкой во второй пробирке, содержащей тот же раствор
Перколя, как описано выше.
Поместить две пробирки одинакового веса в ротор центрифуги и центрфугировать 10-15
минут при 1,5 тыс. оборотов в минуту.
После центрифугирования в пробирке будет несколько слоев градиента. Нас интересует
самый нижний слой, где должно быть до 95% живых спрематозоидов и почти полное
отсутствие ^нормальных спермиев и почти полное отсутствие микроорганизмов.
Отобрать стерильным Шприцем с длинной иглой нижнею фракцию 1 мл, отмыть сперму
от Перколя, добавив к отобранному мл (1 : 1) среду 99 и отцентрифнгировать
общеизвестным способом.
P.S. Доктор Вирджиния Болтон (Virginia Bolton) в своей статье 1986года в журнале «Fertility and Sterility» предлагала центрифугировать сперму в градиенте Перколя в течении 20 мин. При 4 000 оборотов в мин.
Н.З.Жильцов