ВИРУС ЭПШТЕЙНА-БАРР

В 1964 году в материале из биопсии, взятой у африканца, больного лимфомой Беркитта, канадскими учеными М. Epstein и Y. Ваrr был обнаружен неизвестный ранее вирусный агент, названный позднее в честь первооткрывателей вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ) [1]. Этот ДНК-содержащий вирус с двуспиральной ДНК длиной 172 тысячи пар оснований имеет форму сферы диаметром 180 нм. ВЭБ относят к подсемейству Gamma Herpesviridae рода Gymphocrypto-virus, и он является вирусом герпеса человека 4 типа.
Установлено, что ВЭБ имеет глобальное распространение и обнаруживается у населения всего земного шара. Он является убиквитарным человеческим патогеном, поражающим эпителиальные клетки слизистых оболочек «дыхательных путей, пищеварительного тракта, половых органов», а также клетки иммунной системы, в том числе В-лимфоииты, в которых происходит репликация вирусных частиц.
К настоящему времени доказано, что ВЭБ является этиологическим агентом таких заболеваний, как инфекционный мононуклеоз (ИМ), назофарингеальная карцинома (НФК), лимфома Беркитта, Т-клеточная лимфома, болезнь Ходжкина [2-4]. В организме ослабленных людей ВЭБ часто может вызывать лимфопролиферативные изменения. Так, у ВИЧ-инфицированных и больных, получающих курс иммуносупрессивной терапии, проводимой при пересадке органов, нередко наблюдают развитие тяжелых диссеминированных форм новообразований в лимфоузлах, а также поражение слизистой оболочки рта волосатой лейкоплакией.
У людей без выраженных дефектов иммунной системы инфекция ВЭБ протекает субклинически и сопровождается положительными серологическими реакциями. Однако при массированном поступлении вируса в организм или иммунодефицитных состояниях можно наблюдать вирусемию. Вирус проникает в лимфоузлы и органы, богатые ретикуло-эндотелиальными клетками, развивается лимфоаденопатия, заметно увеличиваются печень и селезёнка. Симптомы интоксикации и лихорадка обусловлены воздействием токсинов, а катар верхних дыхательных путей — непосредственным воздействием вируса.
Основной путь передачи ВЭБ — воздушно-капельный, фактор передачи — контаминированная вирусом слюна. Возможно заражение через содержащие вирус пищевые продукты, а также бытовым путем — через руки и предметы обихода. Предполагают также возможность трансмиссивного пути передачи на основе территориального совпадения «лимфоидного пояса» (районы распространения лимфомы Беркитта) с зоной распространения москитов рода Anophelesu Monsonia. Последние исследования подтверждают версию о возможности переноса вируса путем гемотрансфузии (с донорской кровью) и при других парентеральных вмешательствах [5]. Зафиксирован также половой путь передачи ВЭБ [6].
В настоящее время для точной диагностики ИМ и других заболеваний, вызываемых ВЭБ, все шире применяют определение в сыворотках крови обследуемых лиц вирусспецифических антител (AT).
Особенностью гуморального иммунного ответа человека на ВЭБ является дифференцированная во времени продукция иммуноглобулинов классов G и М на различные вирусные белки. Это позволяет с высокой эффективностью диагностировать различные стадии ВЭБ-инфекции у пациента.
На рис. 1 приведена в общем виде динамика продукции антител к различным группам иммуногенных белков ВЭБ при типичном развитии инфекционного процесса в организме человека [7].
На ранних фазах развития инфекции в сыворотке крови обнаруживают IgM к вирусному капсидному антигену (VCA), а также IgG к раннему антигену (ЕА). Паст-инфекцию характеризует появление иммуноглобулинов клacca G к нуклеарному антигену (ЕВNА-1).

Рис. 1. Динамика продукции антител к белкам ВЭБ при типичном развитии инфекции

В таблице 1 приведена возможная интерпретация результатов комплексного тестирования с применением иммуноферментного анализа (ИФА) [8].

Таблица 1
Интерпретация серологических данных комплексного тестирования с применением иммуноферментного анализа

Стадия инфекции
ЕА
VGA
EBNA-1 IgG

IgG
IgM

Инкубационный период илиотсутствиеинфицирования
—
—
—

Очень ранняя первичная инфекция
—
+
—

Ранняя первичная инфекция
+
+
—

Поздняя первичная инфекция
+
±
+

Атипичная первичная инфекция
—
—
+

Хроническая инфекция
+
±
—

Ранняя паст-инфекция

Поздняя паст-инфекция (латентнаяинфекция у клинически здоровых лиц)
—
—
+

Реактивация
+
+
+

Атипичная реактивация
+
—
+

Примечание: ЕА — ранний антиген, VCA — вирусный капсидный антиген, IgM — иммуноглобулины класса М, IgG — иммуноглобулины класса G, «+» — положительная реакция, «-» — отрицательная реакция «±» — слабоположительная реакция

В ЗАО «Вектор-Бест», на основе тщательного анализа литературных данных, был проведен выбор рекомбинантных белков ВЭБ для использования в ИФА, созданы клетки-продуценты белков и отработаны эффективные методы очистки белков.
Это явилось основой для разработки тест-систем «ВектоВЭБ-EA-IgG» и «ВектоВЭБ-VCA-IgM» для диагностики острой стадии инфекции, а также «ВектоВЭБ-NA-IgG» для выявления IgG к нуклеарному антигену EBNA-1 и диагностики паст-инфекции ВЭБ.
Дополнительным подтверждением течения стадий инфекции может служить тест по выявлению ДНК ВЭБ в крови и/или слюне методом полимеразной цепной реакции (ПЦP). Этот тест весьма эффективен для выявления ВЭБ-инфекции у новорожденных, когда выявление серологических маркёров малоэффективно вследствие несформировавшейся иммунной системы, а также в сложных и сомнительных случаях. Для выявления ДНК ВЭБ методом ПЦР в ЗАО «Вектор-Бест» разработана тест-система «ВектоВЭБ-ДНК-ампли-100».
С помощью сконструированных тест-систем был проведен ИФА 404 сывороток больных и здоровых новосибирцев. В исследовании были использованы 4 группы сывороток:

доноров (200 образцов);
беременных женщин (100 образцов);
детей, контрольная группа (50 образцов);
детей с диагнозом ИМ, установленным по клинико-гематологическим показателям и результатам выявления ДНК ВЭБ в крови и/или слюне методом ПЦР (54 образца).

Результаты исследований приведены в таблице 2.
У больных с диагнозом ИМ (4 группа) IgG к ЕА были выявлены в 85% случаев, IgM к VCA — в 88% случаев. Количество пациентов, имеющих хотя бы один или два маркера острой стадии инфекции, составило 98%. Самое низкое количество сывороток, содержащих такие антитела (менее 2%), зафиксировано в группе 2 — беременные женщины. У 15%

Таблица 2
Результаты обследования пациентов методами ИФА и ПЦР

Группы обследованных
Количество наблюдений
Маркеры острой стадии
Паст-инфекций
ДНК (ПЦР)

(IgG к EA, IgМ к VCA)
(IgG к EBNA)

Количествоположительныхрезультатов
Титры
Количествоположительныхрезультатов
Титры

1 группа, доноры
200
15 %
1:100- 1:200
95%
1:3200 и выше
Нет анализа

2 группа, беременные женщины
100
2%
1:100- 1:200
88%
1:1600 и выше
Нет анализа

3 группа, дети, контрольная группа
50
5%
1:100- 1:200
90%
1:1600 и выше
Нет анализа

4 группа, дети с диагнозом инфекционный мононуклеоз
54
98%
1:1600 и выше
8%
1:100-1:200
100%

Примечание: ЕА — ранний антиген, VCA — вирусный капсидный антиген, EBNA-1 — нуклеарный антиген.

Тест-системы производства ЗАО «Вектор-Бест» для диагностики инфекции, обусловленной вирусом Эпштейна-барр № по каталогу Наименование Количество анализов D-2170 ВектоВЭБ-NA-IgG-стрип 12.8 D-2172 ВектоВЭБ-EA-IgG-стрип 12.8 D-2176 ВектоВЭБ-VCA-IgM-стрип 12.8 D-2174 ВектоВЭБ-ДНК-ампли-100 100 доноров (1 группа) и 5% детей контрольной группы (3 группа) также выявлены антитела активной фазы. В то же время IgG к нуклеарному белку EBNA-1 ВЭБ выявлены в 88-95% случаев в первых 3-х тестируемых группах, что свидетельствует об уже перенесенной инфекции. У детей 4 группы такие IgG выявляли только в 8% сывороток, что, очевидно, указывает на начальный период паст- инфекиии. Титры АТ-маркеров острой стадии инфекции (к VCA и ЕА) оказались очень высокими в сыворотках 4 группы (1:1600 и выше), в то время как величина титров AT к нуклеарному антигену в этой группе колебалась в пределах 1:100-1:200. Значения титров AT в положительных сыворотках 1 группы для нуклеарного антигена составляли 1:3200 и выше, для 2 и 3 групп — 1600 и выше, а для маркеров острой стадии значения титров колебались в пределах 1:100-1:200.
Таким образом, комплексное использование перечисленных выше иммунодиагностикумов позволяет обеспечить высокую эффективность выявления ВЭБ-инфекции, дифференциации ее стадий и контроля проводимых лечебных мероприятий.
Литература
Epstein M. F., Barr Y. М., Lancet, 1964. V. 1. Р. 301-302.
Farber J., Wutzler P., Wohlrabe P., et al., J. Vir. Meth. 1993. V. 42. P. 301-308.
Henle G., Henle W., Adv. Vital. Oncol.1985. V. 5. P. 201-238.
Rickinson F. В., Kieff E. Virology, 1996, 3rd ed., V. 2. P. 2397-2446.
Henle W., Henle G., Harrison F. et al. N. Engl. I. Med. 1968. V. 282. P.1068-1071.
Аранкин Л. И., Залу Н.А. Журнал микробиол. 1982. Т. 1. С. 26-32.
Suma YAC.V., Jenson H. В. In Manual of Clinical Lab. Immunology ed. Rose Mr, Masario E. C. et al. Chapter, 1992. V. 85. P. 568-575.
Hindere W., Hebel-Schikel H., Horn G. Biotest Bulletin. 1993. V. 5. P. 533-546.

Тест-системы производства ЗАО «Вектор-Бест» для диагностики инфекции,обусловленной вирусом Эпштейна-Барр

N покаталогу
Наименование
Количествоанализов

D-2170
ВектоВЭБ-NA-IgG-стрип
12х8

D-2172
ВектоВЭБ-EA-IgG-стрип
12х8

D-2176
ВектоВЭБ-VCA-IgM-стрип
12х8

D-2174
ВектоВЭБ-ДНК-ампли-100
12х8