Трихомонады Trichomonas vaginalis

Актуальные вопросы диагностики урогенитального трихомониаза
Е. Г. Бочкарев, Ю. В. Сергеев, В. М. Копылов, Д. В. Рюмин
Институт аллергологии и клинической иммунологии, НИИ физико-химической медицины МЗ РФ, Москва

Обобщенные данные по микроскопии, иммунофлюоресценции, иммуноферментному методу, полимеразной цепной реакци и (ПЦР) и культуральному методу, применяющимся в диагностике инфицирования Trichomonas vaginalis. Методы генодиагностики (ПЦР) являются более эффективными по сравнению с традиционными (изоляция в культуре, иммунофлюоресценция, микроскопия, иммуноферментные методы).
Недостатком ПЦР могут являться ложноположительные результаты вследствие контаминации ДНК. К ложноотрицательным результатам могут приводить наличие ингибиторов ПЦР в клинических образцах.
Для достоверной диагностики трихомониаза необходим комплекс лабораторных методов, позволяющих выявить возбудителя.
Ключевые слова: урогенитальный трихомониаз, диагностика.
Трихомониаз — заболевание мочеполовой системы, вызванное простейшим одноклеточным паразитом Trichomonas vaginalis. Основными носителями инфекции являются женщины репродуктивного возраста. Заболевание передаётся половым путём, в крайне редких случаях возможно заражение через контаминированные поверхности и может протекать как в виде бессимптомного носительства, так и клинически выраженного вульвовагинита. T.vaginalis инфицирует исключительно сквамозный эпителий урогенитального тракта. Инкубационный период обычно составляет от 4 до 28 дней у примерно 50% инфицированных лиц, но может сокращаться до 1-3 дней [1,4,5,36].
Клиническая картина острой формы инфекции у женщин представлена диффузным вульвовагинитом вследствие обширной лейкорреи (выделение из влагалища бело-жёлтой тягучей жидкости со слизью или гноем). Отделяемое обычно пенистое, жёлтого или зелёного цвета, слизисто-гнойной консистенции. Примерно у 2% пациенток могут быть обнаружены незначительно выраженные геморрагии на слизистой влагалища, шейки матки и цервикального канала («клубничное проявление») .
При хроническом течении болезни преобладает слабовыраженная симптоматика: зуд и диспарения (боли во время коитуса) по причине скудного вагинального секрета. Эта форма заболевания особенно важна с эпидемиологической точки зрения, поскольку такие лица являются главными источниками передачи инфекции.
Вплоть до 25-50% инфицированных женщин имеют бессимптомное носительство, при нормальных значениях рН влагалища 3,8-4,2 и относительно нормальной вагинальной флоре. Если у таких женщин констатировано носительство трихомонад, то , как правило, клинические симптомы развиваются только у половины пациенток в течение 6-ти месяцев, последующих за первичным обращением.
Вагиниты — наиболее частое проявление трихомониаза у женщин. Бартолиниева железа также может являться частым фокусом инфекции.
Вообще многоочаговость поражения при мочеполовом трихомониазе отмечается многими исследователями: аднекситы, пиосальпингиты, кольпиты, эндометриты, эрозии шейки матки, циститы, уретриты и др.[24,30]
Мужской трихомониаз чаще всего протекает бессимптомно, в связи с чем мужчины также могут являться носителями T.vaginalis. Наиболее выраженным клиническим проявлением заболевания у них являются уретро- и везикулопростатиты. Значительно реже развиваются орхиты и орхоэпидидимиты, что, как правило, обусловлено смешанной протозойно — бактериальной урогенитальной инфекцией .
Общие жалобы у мужчин включают скудные, слизисто-гнойные выделения, дизурию, слабый зуд или жжение немедленно после коитуса. Осложнения, связанные с трихомониазом, включают негонококковый уретрит и другие урогенитальные заболевания: простатит, везикулит, баланопостит, эпидидимит [18,19].
Лабораторная диагностика трихомонадной инфекции
Диагностика основана на выявлении клинических признаков заболевания и обнаружении в исследуемом материале T.vaginalis. однако при постановке диагноза не следует опираться исключительно на данные клинической картины по следующим причинам:
— указанные клинические симптомы могут быть проявлениями других инфекций урогенитального тракта;
— классический и патогномоничный для трихомониаза «клубничный» симптом встречается только у 2% пациенток;
— пенистые выделения, которые можно связать с активным ростом трихомонад, наблюдаются примерно у 12% инфицированных женщин.
Другие человеческие трихомонады, наблюдаемые при лабораторной диагностике, в основном, следует рассматривать как контаминациию во время забора материала. Такие ошибки в диагностике трихомониаза чаще случаются при обследовании детей [17]. Однако в связи с изменением стереотипов сексуального поведения в последнее время (промискуитет, увеличение частоты орально-генитальных и анально-генитальных контактов) необходимо учитывать возможность определения в урогенитальном тракте больных трихомониазом других видов трихомонад — Trichomonas tenax (elongata), Trichomonas hominis (abdominalis). В то же время при электронно-микроскопическом исследовании материала прямой кишки при мочеполовом трихомониазе были обнаружены T.vaginalis, что подтверждает возможность смены простейшими привычной среды обитания и колонизации новой экологической ниши [2].
В настоящее время применяют четыре лабораторных метода определения Trichomonas vaginalis: микроскопический, культуральный, иммунологический и генодиагностический [30].
Микроскопический метод включает две методики. Первая — это определение трихомонад в нативном препарате при фазовом контрастировании. Необходимо найти овальное или грушевидное тело, чуть больше лейкоцита, имеющее жгутики и совершающее характерные толчкообразные поступательные движения. Такое исследование следует делать практически «не отходя от пациента», иначе в течение нескольких минут влагалищная трихомонада может прекратить свои движения. Вторая методика — это окрашивание препарата метиленовым синим (как вариант: раствором бриллиантовой зелени) или по Граму. Ведётся поиск известной формы трихомонады с правильно очерченным асимметричным ядром на фоне нежно-ячеистой структуры цитоплазмы. Для выявления жгутиков и ундулирующей мембраны препарат следует изучать методом окраски по Романовскому-Гимзе.
Этот метод имеет самую низкую чувствительность (от 38% до 82%) относительно других методов лабораторной диагностики. Это может быть обусловлено, в первую очередь, потерей трихомонадами характерной подвижности после того, как простейшее уже извлечено из среды человеческого организма. Особенно большая доля субъективизма проявляется в препаратах с низким титром простейших или в препаратах, содержащих огромное количество клеток эпителия, лейкоцитов и различного деструктивного материала из очага поражения («гнойный мазок»). В очаге поражения влагалищная трихомонада часто представлена округлыми формами, напоминающими полиморфноядерные лейкоциты, и, естественно, типичные морфологические признаки теряются во время фиксации и окрашивания, создавая трудность для этиологической идентификации.
Метод выращивания трихомонад в бульонной культуре — «золотой стандарт» диагностики. Он прост в интерпретации и требует менее, чем 300-500 трихомонад/мл для начала роста в культуре. Тем не менее, для него существуют ограничения, присущие культуральным методам. Для диагностики необходим инкубационный период от 5 до 7 дней, являющийся слишком длительным из-за возможности распространения инфекции инфицированным пациентом. В связи с этим он не получил широкого применения в клинической практике в качестве прямого диагностического метода.
Для улучшения восприятия культурального метода за рубежом был разработан метод пластикового конверта, с помощью которого можно выполнить как немедленную проверку, так и сохранить культуральный метод в одной самоподдерживающейся системе. Результаты являются сравнимыми с таковыми при исследовании мазка и культур. Аналогично пластиковому конверту, метод системы InPouch — это двухкамерный мешок, позволяющий выполнять быструю проверку культуры путём микроскопии через стенку мешка.
Технология роста патогена на клеточной культуре предусматривает восстановление T.vaginalis из клинических образцов. Было продемонстрировано, что этот метод лучше относительно культивирования в бульоне и приготовления влажной камеры, поскольку способен определять T.vaginalis в концентрациях менее 3 организмов в 1 мл. Однако культивирование в культуре — это не простой рутинный метод; он дорог и неудобен для быстрой диагностики.
В России культуральный метод — это второй основной метод, используемый в лабораторной диагностике трихомониаза, и первый по своей значимости до середины 90-х годов. Проведенный в 1990 г. анализ качества диагностики трихомониаза в ЦНИКВИ МЗ РФ показал, что подавляющее число больных трихомониазом (72,8%) как среди женщин, так и среди мужчин было выявлено при использовании именно культурального метода. Из отчественных стандартных сред, не уступающих по качеству зарубежной среде Джонсона-Трасселя, можно рекомендовать в практическое здравоохранение среду, изготавливаемую по инструкции ЦНИКВИ МЗ РФ: в 1 литр дистиллированной воды вносится 12,5 г белкового порошка (ТУ 64- 3-204-84, получаемый из отхода при производстве лизоцима), хлорид калия 0,1 г, хлорид кальция 0,1 г , двууглекислый натрий 0,1 г , аскорбиновая кислота 0,6 г , лимонная кислота 0,12 г , оротовая кислота 0,075 г, лактат кальция 1,0 г , мальтоза 10,0 г. Смесь стерилизуется при 0,5 атмосферы в течение 30 мин в атмосфере текучего пара. После охлаждения стерильно вносится 220 мл лошадиной сыворотки и антибиотики (из расчёта 1000 Ед/мл пенициллина, 1000 мкг/мл стрептомицина и 40 Ед/мл амфоглюкамина или 4000 Ед/мл линкомицина.
Ограничения культуральных и микроскопических методов для выявления T.vaginalis способствовали развитию альтернативных методов, позволяющих выявлять антигены, антитела или нуклеиновые кислоты в уретральном или вагинальном экссудате.
Определение антитрихомонадных антител
Иммунологические методы не получили, к сожалению, должного распространения в России из-за отсутствия качественных отечественных тест-систем. Существует восемь известных серотипов T.vaginalis, в то же время, по данным иммуноблота, возможно более широкое варьирование антигенных маркёров. Используются различные методы определения антитрихомонадных антител: агглютинация, фиксация комплемента, непрямая гемагглютинация, диффузия в геле, флюоресценция антител и фермент-связанный иммуносорбционный анализ.
Местный гуморальный ответ на патогенный агент зависит от следующих факторов: характера субстанции антигена или патогена, его живой или убитой форм, концентрации, частоты и длительности стимуляции иммунной системы, поэтому в некоторых случаях гуморальный ответ не наблюдается из-за того, что система либо малочувствительна для выявления низкого уровня специфических антител, либо потому, что не был вызван гуморальный ответ. В связи с тем, что антитрихомонадные антитела могут циркулировать в сыворотке крови в течение длительного времени после проведенного курса лечения, практически невозможно дифференцировать состояние болезни от реконвалесценции.
Выявление антигенов трихомонад. Клиническое значение имеет прямое определение специфических белков T.vaginalis в биопробах с использованием моноклональных антител в качестве быстрого метода диагностики трихомониаза. Моноклональные антитела для выявления T.vaginalis из клинических образцов давали аналогичные результаты с влажными препаратами для микроскопии. Более того, использование моноклональных антител к белкам, таким, как КРФ и цистеиновая протеаза, являющихся иммуногенами всех наблюдавшихся изолятов T.vaginalis, могло бы обеспечить альтернативный метод определения влагалищной трихомонады.
Прямой иммуноферментный и иммунофлюоресцентный анализ мазков вагинального соскоба, например, коммерческий метод фирмы California Integrated Diagnostics, Benicia, Calif., использующий пероксидазо- и флюорохром-меченные смеси моноклональных антител к различным структурам T.vaginalis был таким же чувствительным и специфическим, как и используемый культуральный метод. К тому же результаты определения возбудителя трихомониаза данным методом достигаются в течение одного часа, что позволяет осуществлять контрольно-диагностическую функцию.
 
Далее…
Иммунопатология. Аллергология. Инфектология

Комментариев пока нет.

Добавить комментарий


Беркегейм Михаил

About Беркегейм Михаил

Я родился 23 ноября 1945 года в Москве. Учился в школе 612. до 8 класса. Мама учитель химии. Папа инженер. Я очень увлекался химией и радиоэлектроникой. Из химии меня очень увлекала пиротехника. После взрыва нескольких помоек , я уже был на учете в детской комнате милиции. У меня была кличка Миша – химик. Из за этого после 8 класса дед отвел меня в 19 мед училище. Где меня не знали. Мой отчим был известный врач гинеколог. В 1968 году я поступил на вечерний факультет медицинского института. Мой отчим определил мою профессию. Но увлечение электроникой не прошло, и я получил вторую специальность по электронике. Когда я стал работать врачом гинекологом в медицинском центре «Брак и Семья» в 1980 году, я понял., что важнейшим моментом в лечении бесплодия является совмещение по времени секса и овуляции. Мне было известно, что овуляция может быть в любое время и несколько раз в месяц. И самое главное, что часто бывают все признаки овуляции. Но ее не происходит. Это называется псевдоовуляция. Меня посетила идея создать прибор надежно определяющий овуляцию. На это ушло около 20 лет. Две мои жены меня не поняли. Я мало времени уделял семье. Третья жена уже терпит 18 лет. В итоге прибор получился. Этот прибор помог вылечить бесплодие у очень многих женщин…
×
Записаться на приём или задать вопрос