С-пептид

С-Пептид (EIA-1293)121248 Москва, Набережная Тараса Шевченко, д. 3, Московское представительство «DRG International, Inc.»тел. (499) 243-5621, 243-5228, 243-4028, факс (495) 232-0211, (499) 243-9300; e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ruВСТУПЛЕНИЕИммуноферментный анализ для количественного определения человеческого С-пептида в сыворотке, плазме или мочечеловека.Только для диагностического использования in vitroИнсулин ситезируется в поджелудочной железе β-клетками островков Лангерганса как компонент весом 6000 Да исостоящий из 86 остатков аминокислот поипептид под названием проинсулин. Проинсулин подвергаетсяпоследовательному ферментному расщеплению, высвобождая инсулин в циркуляторное русло вместе с оставшимсяфрагментом весом 3000 Да и называющимся Связывающий («С») Пептид. Назван он так, потому что связывает A и Bцепи инсулина внутри молекулы проинсулина. Человеческий С-Пептид – это пептид, состоящий из 31 аминокислоты, смолекулярным весом около 3000 Да. Он не влияет на метаболизм. Однако, так как С-Пептид и Инсулин секретируются вэквимолярных количествах, ИФА на С-пептид позволяет подсчитать секрецию инсулина. Это и есть смысл дляопределения С-пептида в сыворотке и моче. Тем более, Измерение С-пептида имеет несколько преимуществ посравнению с измерением инсулина.Период полураспада С-пептида в кровотоке от 2 до 5 дольше, чем у инсулина. Поэтому уровень С-пептида болеепоказателен и стабилен, чем инсулиновый, который, в свою очередь, не стабилен и способен резко меняться.Совершенно ясное практическое преимущество измерения С-пептида, идущее от его отосительной метаболическойинертности по сравнению с инсулином, – это то, что уровень С-пептида в периферической венозной крови около 5 – 6раз выше уровня инсулина. Также, по сравнению с тестом на инсулин, тест на С-пептид позволяет определить уровеньэндогенного инсулина и отличить его от введенного. Поэтому низкий уровень С-пептида должен проявиться, когдасинтез инсулина снижен (как при инсулин-зависимом диабте) или подавлен (как нормальный ответ на введениеэкзогенного инсулина), в то время как повышенный уровень С-пептида может быть результатом гиперактивности β-клеток, наблюдаемой при инсулиномах. С-пептид может также применяться как вспомогательный тест на толерантностьк глюкозе, а также глюкозный тест на глибенкламид. Для измерения секреции эндогенного инсулина лучше измерять С-пептид, чем периферический инсулин. С-пептид можно измерять как в крови, так и в моче. Современные методы ИФАпозволяют определять предельно низкие концентрации С-пептида. Клинические показания для определения с-пептидавключают в себя диагностику инсулиномы и различие от искусственно созданной гипогликемии, отслеживаниепоследствий панкреатектомии, а также оценка жизнеспособности пересаженных клеточных трансплантантов. Недавноэти показания были серьезно расширены возможностью оценивать инсулиновую зависимость при приступах сахарногодиабета у взрослых.Клинические показания для DRG® C-Peptide ELISA− Оценка функционирования остатков β-клеток у диабетиков под инсулинотерапией− Определение и мониторинг стадии ремиссии диабета I типа− Дополнение к дифференциальной диагностике диабета I типа (инсулинзависимого) и II типа (инсулиннезависимого)− Диагностика усиленной инсулином искусственной гипогликемии− Вклад в диагностику инсулиномы (тест на инсулиновую суппрессию)− Прогноз возможности выкидыша у беременных женщин-диабетиков− Оценка секреции инсулина при заболеваниях печени− Мониторинг последствий панкреатектомииПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ ДЛЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЕЙ• Данный набор предназначен только для диагностики ин-витро.• Информацию по опасным веществам можно найти в сертификате безопасности.• Не существует методов тестирований, на 100% гарантирующих отсутствие компонентов вируса Гепатита Б, ВИЧ(HIV/HTLV-III/LAV), или других инфекций. Поэтому все продукты, содержащие компоненты человеческой кровидолжны рассматриваться как потенциально инфицированные. Поэтому при работе с ними необходимо соблюать всемеры предосторожности, установленные в лабораторной практике.• Избегайте контакта кожи со Стоп-раствором – 0,5 М H2SO4. Это может вызвать раздражения и ожоги.• Никогда не пипетируйте ртом и избегайте контакта реагентов и образцов с кожей и слизистыми.• Не курите, не еште, не пейте и не пользуйтесь косметикой на месте проведения анализа.• Ползуйтесь одноразовыми латексными перчатками при обращении с реагентами и образцами. Микробнаяконтаминация реагентов и образцов может дать ошибочный результат.• Немедленно после использования закройте реагенты крышками. Не путайте крышки от реагентов.С-Пептид (EIA-1293)121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.3, Московское Представительство «DRG International, Inc.»тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ru• Не используйте реагенты с истекшим сроком годности.• Не используйте в исследовании компоненты из наборов разных Лотов.КОМПОНЕНТЫ НАБОРА1. Планшета с микролунками, покрытыми анти-мышиними антителами, 96 лунок.2. Стандарты (0-5), 6 флаконов по 0.75 мл 0 – 16 нг/мл (см. этикетки на флаконах).3. Раствор для разведения образцов, 1 флакон, 3 мл, готов к использ.4. Антисыворотка, 1 флакон, 7 мл., готова к использ., мышиные моноклональные антитела к C-пептиду.5. Ферментный конъюгат, 1 флакон, 14 мл, готов к использ., биотинилированный С-пептид.6. Ферментный комплекс, содержащий пероксидазу хрена, 1 флакон, 14 мл.7. Субстрат — TMB, 1 флакон, 14 мл.8. Стоп-раствор, 1 флакон, 14 мл, 0,5 M H2SO49. Промывочный буфер, концентрированный, 40X, 30 мл (см. приготовление реагентов)МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ, НО НЕ ВКЛЮЧЕННЫЕ В НАБОР1. Микроплашечный ридер (450±10 нм), например DRG E-LIZA MAT 30002. Прецезионные микропипетки с одноразовыми наконечниками на 100, 200 и 1000 мкл.3. Дистиллированная вода4. Aбсорбирубщая бумагаУСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯПри температуре хранения от 2 до 8С невскрытые реагенты сохраняют активность до истечения срока годности. Послеистечения этой даты реагенты использовать не рекомендуется. Конъюгат, субстрат, стандарты и нулевой стандартдолжны храниться при 2-8°С. Микропланшета должна храниться при 2-8°С. После вскрытия фольгированного пакетапри хранении пакет необходимо держать плотно закрытым.ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВСтандарты: восстановите лиофилизированные стандарты 0,75 мл дистиллированной воды. Восстановленные стандартыстабильны до в течение 3-х дней при 2 – 8 °С. Для более длительного хранения заморозить до – 20 °СПромывочный раствор: разведите 30 мл концентрата промывочного раствора 1170 мл деионизированной воды (дообъема 1200 мл) Разведенный промывочный раствор стабилен в течение 2 недель при 2 – 8 °С.ЗАБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБA. Сыворотка или плазма: При заборе сыворотки и плазмы стандартным методом венопункции необходимособлюдать обычные меры предосторожности. Нет необходимости подвергать образцы дополнительной обработке.Образцы могут храниться в течение 24 часов при 2-8°С и должны быть заморожены до – 10 ºС или ниже для хранения втечение более длительного периода. Не использовать гемолизные и липемические пробы.Образцы с ожидаемойконцентрацией С-пептида выше верхней границы стандартной кривой необходимо развести раствором для разведенияобразцов.B. Моча:1. Весь объем мочи, выделенный за 24 часа, должен быть собран и перемешан в одном контейнере.Замечание: Образцы должны храниться при 2 – 8 °С в течение периода сбора. Общий собраный объем должен бытьзаписан.2. В этом исследовании должен быть использован хорошо перемешанный образец. Образец, разделенный на аликвотыи центрифугированный до прозрачности, хранят при – 10 °С или ниже до начала исследования.3. Исследуйте образец разведенным 1:20 раствором для разведения образцов.Хранение образцовОбразцы должны быть накрыты и могут храниться до 24 часов при 2-8° С перед использованием. Образцы,сохраняемые более долгое время можно замораживать только 1 раз до температуры -10°С или ниже. Размороженныеобразцы необходимо смешать переворачиванием несколько раз перед использованием.С-Пептид (EIA-1293)121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.3, Московское Представительство «DRG International, Inc.»тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ruРазведение образцов.Если при первом анализе обнаруживается, что образец имеет более высокую концентрацию, чем самый высокийстандарт, такие образцы необходимо развести в 10 или 100 раз раствором для разведения образцов и протестироватьповторно согласно описанию процедуры анализа.а) разведение 1:10: 10 мкл образца + 90мкл раствора для разведения образцов (тщательно смешать)б) разведение 1:100: 10 мкл раствора 1:10 (а) + 90мкл раствора для разведения образцов (тщательно смешать)Моча: развести 1:20 перед использованиемПРОЦЕДУРА АНАЛИЗАОбщие замечания:− Все реагенты и образцы перед началом исследования должны иметь комнатную температуру. Все реагенты должныбыть перемешаны без образования пены.− После начала исследования все этапы должны быть завершены без остановок− Для каждого образца, реагента и стандарта необходимо использовать новые одноразовые наконечники пипеток. Дляраскапывания субстрата и стоп-раствора избегайте металлических наконечников.− Абсорбция — это функция, линейно пропорциональная инкубационному времени и температуре. Поэтомуинтерполяция возможна при постоянных физико-химических условиях. Если при проведении исследованияабсорбция нулевого стандарта ниже 1,0 или выше верхнего предела обнаружения Вашего спектрофотометра, выможете увеличить или уменьшить инкубационное время окончательного ферментного формирования цвета от 45 до15 минут соответственно. Т.к. калибраторы ставятся в каждом исследовании, эти изменения абсорбции не повлияютна результат.− Как главное правило, фермантная реакция линейно пропорциональна времени и температуре.− До начала исследования рекомендуется приготовить все реагенты, снять крышки, установить в держателенеобходимые лунки, и т.д. Этим Вы обеспечите равное время для каждого раскапывания без остановок.− Субстрат должен быть бесцветным или бледно голубым или зеленым. Если раствор стал темно-синим, реагентиспользовать нельзя.− Во время инкубации с субстратом избегайте попадания прямых солнечных лучей на плашку− Все стандарты, образцы и контроли необходимо тестировать в дублях, обеспечив одинаковые условия реакции.ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ:1. Установите необходимое количество лунок в рамку.2. Раскапать по 100 мкл стандартов, контролей и образцов используя пипетку с новыми одноразовыми наконечникамив соответствующие лунки.3. Раскапать по 50 мкл антисыворотки в каждую лунку.4. Раскапать по 100 мкл конъюгата в каждую лунку.5. Хорошо смешивать в течение 10 секунд. На данном этапе важно достичь полного смешивания.6. Инкубировать 60 минут при комнатной температуре7. Резко вытряхнуть содержимое лунок. Промыть трижды разведенным промывочным раствором (400 мкл на лунку).Вытряхнуть остатки влаги на абсорбирующую бумагу.Внимание: чувствительность и правильность этого анализа в значительной степени зависит от качественнойпроцедуры промывки!8. Добавить по 100 мкл энзимного комплекса в каждую лунку.9. Инкубировать 30 минут при комнатной температуре.10. Резко вытряхнуть содержимое лунок. Промыть трижды разведенным промывочным раствором (400 мкл на лунку).Вытряхнуть остатки влаги на абсорбирующую бумагу.11. Добавить 100 мкл раствора субстрата в каждую лунку12. Инкубировать 20 минут при комнатной температуре.13. Остановить ферментативную реакцию, добавив по 100 мкл стоп-раствора в каждую лунку.14. считать оптические плотности при 450±10 нм на микропланшетном ридере в течение (не позднее) 10 минут последобавления стоп-раствора.С-Пептид (EIA-1293)121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.3, Московское Представительство «DRG International, Inc.»тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ruПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ1. Подсчитать средние значения абсорбции для каждого набора стандартов, контролей и образцов пациентов.2. Построить стандартную кривую, отложив значения абсорбции каждого стандарта (на оси Y) напротив ихконцентраций (отложенных на оси X).3. Используя среднее значение абсорбции для каждого образца определить соответствующую концентрацию постандартной кривой.4. Автоматический метод: компьютерные программы, использующие кубический сплайн, 4 –параметровую логистику,или Logit-Log обычно дают точный результат.5. Концентрацию образцов можно считать прямо со стандартной кривой. Образцы с концентрацией более высокой, чему самого высокого стандарта необходимо развести 1 к 10 раствором для разведения образцов. При подсчетеконцентрации коэффициент разведения необходимо учитывать.Ниже приведен типичный пример стандартной кривой :Стандарт Оптические единицыСтандарт 0 (0 нг/мл) 1,82Стандарт 1 (0,2 нг/мл) 1,64Стандарт 2 (0,7 нг/мл) 1,46Стандарт 3 (2,0 нг/мл) 1,02Стандарт 4 (6,0 нг/мл) 0,47Стандарт 5 (16 нг/мл) 0,21ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯНастоятельно рекомендуется каждой лаборатории разработать собственные нормальные значения и отклонения.Во время исследования, проведенного на внешне зоровых людях, используя DRG® C-Peptide ELISA, были полученыследующие значения:Количество Средний ± 2 СОСыворотка (12-часовое голодание) 60 0,5 – 3,2 нг/млМоча 1 – 200 мкг/деньХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДАДиапазон исследования0 – 16 нг/млСпецифичность антител (перекресная реактивность)Перекресная реактивность с Проинсулином клинически не важна.Аналитическакя чувствительностьБыла посчитана со среднего значения минус два стандартных отклонения 20 репликантов Стандарта О и составила0,064 нг/мл.ТочностьВнутрипостановочная вариация (Интра-анализ)Образец Количество Среднее значение (нг/мл) Коэффициент вариации (%)1 20 0,48 6,542 20 2,30 6,703 20 3,86 5,13Межпостановочная вариация (Интер-анализ)Образец Количество Среднее значение (нг/мл) Коэффициент вариации (%)1 12 0,42 9,332 12 2,05 9,923 12 4,23 8,38С-Пептид (EIA-1293)121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.3, Московское Представительство «DRG International, Inc.»тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ruПравильностьКонтроль качестваРекомендуется использовать контроли согласно нормативной документации. Использование контролей рекомендуетсяпроводить для удостоверения в правильности проведения анализа. Используйте контроли для нормальных ипатологических значений. Результаты по контрольным сывороткам для данного лота можно найти в прилагаемом скаждым набором листе контроля качества. Также рекомендуется участвовать в национальных программах по контролюкачества ВСВОК. Используйте соответствующие статистические методы расчета контрольных значений и зависимости.Если результаты анализа не соответствуют заявленным значениям, тест признается неверным. В этом случае проверьтеоборудование, оцените правильность выполненных при анализе действий и условия среды, в которой проводился анализ,обратите внимание на процедуру мойки и аспирации. Если никаких нарушений вы не выявили, свяжитесь спредставительством напрямую DRG®.ВоспроизводимостьОбразцы сыворотки были усилены добавлением С-пенптида с извесной концентрацией в пропорции 1:1. Процентвоспроизводимости был посчитан умножением отношения измеренных значений к ожидаемым на 100.ОбразецсывороткиЭндогенныйС-пептид, нг/млДобавленныйС-пептид, нг/млИзмеренная конц.,нг/млОжидаемаяконц., нг/млВоспроизводимость,%1 5,36 0,008,003,001,000,355,3610,315,573,633,0810,685,683,683,0396,698,098,7101,82 9,70 0,008,003,001,000,359,7012,498,235,154,5412,857,855,855,2097,2104,887,987,23 12,12 0,008,003,001,000,3512,1215,529,727,305,6514,069,067,066,41110,4107,3103,488,1ОбразецМочиЭндогенныйС-пептид, нг/млДобавленныйС-пептид, нг/млИзмеренная конц.,нг/млОжидаемаяконц., нг/млВоспроизводимость,%1 2,18,003,001,0010,95,572,610,15,12,62107,9109,299,22 1,018,003,001,009,24,032,29,014,012,01102,1100,5109,53 12,128,003,001,0010,15,33,810,55,53,596,296,4108,6С-Пептид (EIA-1293)121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.3, Московское Представительство «DRG International, Inc.»тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ruЛинейностьОбразец Разведение Измеренная конц., нг/мл Ожидаемая конц., нг/мл Воспроизводимость, %1сыворотканеразв1:21:41:81:166,103,251,610,840,416,103,051,520,760,38106,7105,3110,6107,62сыворотканеразв1:21:41:81:169,905,592,481,290,699,904,952,481,240,62112,8100,3104,0111,83сыворотканеразв1:21:41:81:1613,256,973,221,700,8513,256,623,311,660,83105,197,1102,8103,1Образец Разведение Измеренная конц., нг/мл Ожидаемая конц., нг/мл Воспроизводимость, %1мочанеразв1:21:41:88,74,292,011,098,74,352,181,0998,692,4100,22мочанеразв1:21:41:89,24,72,251,129,24,62,31,15102,297,897,53мочанеразв1:21:41:813,96,63,31,813,96,953,481,7495,095,0103,6ОГРАНИЧЕНИЯ ПРОЦЕДУРЫМешающие веществаЛюбое неправильное обращение с образцами или модификация данного теста может повлиять на результаты.Гемоглобин (до 4 мг/мл), билирубин (до 0,5 мг/мл) и триглицериды (до 30 мг/мл) не влияют на результаты анализа.Взаимодействие с лекарственными веществамиНа сегодняшний день нам не известно ни одного вещества (ЛВ), которое бы влияло на измерение С-пептида в образце.ПРАВОВАЯ ОСНОВАНадежность результатовТест должен проводиться строго согласно инструкции производителя. Более того, пользователь должен быть знаком справилами и стандартами GLP, а также с Российским законодательством в сфере лабораторной диагностики. Особенно,это важно с использованием контрольного материала. Важно использовать контроли во время теста, так как этосвидетельствует о точности набора. Результаты теста приемлемы, только если показатели контроля в соответствующемдопустимом интервале значений, а также все остальные данные вписываются в заявленные. При любых сомнительныхрезультатах связывайтесь с представительством DRG®.С-Пептид (EIA-1293)121248 Москва, Набережная Т. Шевченко, д.3, Московское Представительство «DRG International, Inc.»тел. (495) 243-5621, 243-5228, 243-4028 факс (495) 243-9300, 232-0211 e-mail: drgtech@dol.ru http://www.drgtech.ruТерапевтические действияДействия врача не должины базироваться лишь на одеом виде диагностики, даже если эти результаты достоверны исовпадают с контрольными. Любой лабораторный результат лишь дополняет клиническую картину пациента. Врачдолжен принимать только достоверные результаты лабораторных исследований. Сам по себе результат не можетслужить основанием для постановки диагноза.ОтветственностьЛюбая модификация теста и/или обмен, или смешивание компонентов из одного набора в другой разных лотов можетнегативно отразиться на результатах тестов. Такие рекламации не рассматриваются.Рекламации по ошибкам потребителя также не рассматриваются.ЛИТЕРАТУРА5. Ashby, J. and Frier, B.: Circulating C-Peptide: Measurement and Clinical Applications. Annals of Clinical Biochemistry.18:125, 19816. Beischer, W.: Proinsulin and C-Peptide in Humans. Hormones in Normal and Abnormal Human Tissues. Volume 3K,Fotherby and Pal, S., ed. (Berlin: Walter DeGruyter). pp. 1-43, 19837. Beyer, J., Krause V., Cordes V.: C-Peptide: Its Biogenesis, Structure, Determination and Clinical Significance. GiornaleItaliano di Chimica Clinica 4 Supp. 9:22, 19798. Bonger, A. and Garcia-Webb, P.: C-Peptide Measurement: Methods and Clinical Utility. CRC Critical Reviews in ClinicalLaboratory Sciences. 19:297, 1984.9. Blix, P. Boddie-Wills, C., Landau, R., Rochman, H. Rubenstein, A.: Urinary C-Peptide: An Indicator of Beta-Cell Secretionunder Different Metabolic Conditions. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 54:574, 1982.10. Rendell, M.: C-Peptide Levels as a Criterion in Treatment of Maturity-Onset Diabetes. Journal of Clinical Endocrinology andMetabolism. 57 (6): 1198, 198311. Horwitz, D., et al.: Proinsulin, Insulin and C-Peptide concentrations in Human Portal and Peripheral Blood. Journal ofClinical Investigation. 55:1278, 197512. Horwitz, D., Kurzuya, H., Rubenstein, A.: Circulating Serum C-Peptide. The New England Journal of Medicine.295:207,197613. Rendell, M.: The Expanding Clinical Use of C-Peptide, Radioimmunoassay. Acta Diabetologica Latina. 20:105, 198314. Heding, L. and Rasmussen, S.: Human C-Peptide in Normal and Diabetic Subjects. Diabetologica. 11:201, 197515. Canivet, B., Harter, M., Viot, G., Balgrac, N., Krebs, B.: Residual ß-Cell Function in Insulin-Dependent Diabetes: Evaluationby Circadian Determination of C-Peptide Immuno reactivity. Journal of Endocrinological Investigation. 3:107, 1980.16. Starr, J., Horwitz, D., Rubenstein, A., Mako, M.: Insulin, Proinsulin and C-Peptide. Methods of Hormone Radioimmunoassay2nd Ed., Academic Press Inc., 197917. Rubenstein, A., Kuruya, H., Horwitz, D.: Clinical Significance of Circulating C-Peptide in Diabetes Mellitus andHypoglycemic Disorders. Archives of Internal Medicine. Vol. 137:625, May 1977.18. Yalow, R., Berson, S.: Introduction and General Considerations. Principles of Competitive Protein Binding Assays. Ch. 2,Eds. Odell, W. and Daugheday, W., J.B. Lippincott Co., Philadelphia, 1971Пересмотрено

Комментариев пока нет.

Добавить комментарий


Беркегейм Михаил

About Беркегейм Михаил

Я родился 23 ноября 1945 года в Москве. Учился в школе 612. до 8 класса. Мама учитель химии. Папа инженер. Я очень увлекался химией и радиоэлектроникой. Из химии меня очень увлекала пиротехника. После взрыва нескольких помоек , я уже был на учете в детской комнате милиции. У меня была кличка Миша – химик. Из за этого после 8 класса дед отвел меня в 19 мед училище. Где меня не знали. Мой отчим был известный врач гинеколог. В 1968 году я поступил на вечерний факультет медицинского института. Мой отчим определил мою профессию. Но увлечение электроникой не прошло, и я получил вторую специальность по электронике. Когда я стал работать врачом гинекологом в медицинском центре «Брак и Семья» в 1980 году, я понял., что важнейшим моментом в лечении бесплодия является совмещение по времени секса и овуляции. Мне было известно, что овуляция может быть в любое время и несколько раз в месяц. И самое главное, что часто бывают все признаки овуляции. Но ее не происходит. Это называется псевдоовуляция. Меня посетила идея создать прибор надежно определяющий овуляцию. На это ушло около 20 лет. Две мои жены меня не поняли. Я мало времени уделял семье. Третья жена уже терпит 18 лет. В итоге прибор получился. Этот прибор помог вылечить бесплодие у очень многих женщин…
×
Записаться на приём или задать вопрос