Гонорея (Neisseria gonorrhoeae, качественное определение)

09-09-2009

Метод: Flash Прибор: Термоциклер T1Материал: В норме в материале отсутствует.
Подготовка к исследованию: соскоб из уретры. Перед взятием материала пациен­ту рекомендуют не мочиться в течение 1,5-2 часов. Перед взятием материала из цервикального канала необходимо удалить слизь ватным тампоном. Исключить попада­ние гноя в пробирку.
Материал для исследования: моча, сперма, секрет предстательной железы, соскобы из урогенитального тракта, конъюнктивы глаза
Хранение материала: Если время транспортировки биоматериала с момента его взятия до доставки в лабораторию составляет более 2-х часов, то пробирку (кроме мочи) необходимо заморозить при -20°С и перевозить в контейнере с хладагентом. В замороженном виде соскоб хранится не более 2-х недель.
Гонококковая инфекция – гонорея – одно из самых древних венерических заболеваний.Возбудитель болезни – гонококк — Neisseria gonorrhoeae – грамотрицательный аэроб, микроаэрофильный кокк. В соответствии с определителем Берджи (9-е издание, т.1, М., 1997) гонококк относится к семейству Neisseriacea, роду Neisseria, виду Neisseria gonorrhoeae.Источник инфекции – больной человек, особенно хронической бессимптомно протекающей формой гонореи. Экологической нишей являются слизистые оболочки мочеполовых путей человека. Механизм передачи – контактный, путь – половой, крайне редко бытовой (например, больная гонореей мать может заразить ребенка при пользовании общей мочалкой, сиденьем унитаза и т. п.), возможно инфицирование плода при прохождении через родовые пути матери. Восприимчивость к гонококкам очень высокая. После перенесенного заболевания невоспреимчивость к вторичным заражениям не вырабатывается; возможны супер- и реинфекции.Для развития заболевания важное значение имеют вирулентность возбудителя, инфекционная доза, область проникновения, функциональное состояние факторов неспецифической резистентности и скорость развития иммунных реакций. Входными воротами для возбудителя служит цилиндрический эпителий уретры, шейки матки, конъюнктивы и прямой кишки. Взаимодействие гонококков с эпителиальными клетками опосредовано пилями, взаимодействующими с рецепторами эпителиальных клеток, что имеет решающее значение в развитии инфекции. Гонококки прикрепляются к эпителию, где мишенью для их цитотоксического действия служат поверхностные структуры клеток. Бактерии вызывают гибель и слущивание клеток, что нарушает процесс самоочищения слизистых оболочек. Нарушение функции слизистых вызывают как сами бактерии, так и ЛПС, а также пептидогликаны клеточных стенок гонококков. Микроворсинки клеток, лишенных ресничек, действуя как псевдоподии, захватывают бактерии, попадающие внутрь этих «непрофессиональных» фагоцитов. Подобное явление известно как эндоцитоз, опосредованный патогенным микробом. В цитоплазме клеток фагосомы сливаются в гигантские вакуоли, где гонококки размножаются, оставаясь недоступными действию АТ, фагоцитов и многих антибиотиков. Вакуоли сливаются с базальной мембраной, и бактерии попадают в прилегающую соединительную ткань, где вызывают местное воспаление, либо проникают в кровоток с возможным последующим диссеминированием. Прикрепившись к эпителию, гонококки становятся недоступными для фагоцитоза. Размножение Neisseria gonorrhoeae внутри нейтрофилов остается предметом дискуссии. В окрашенных мазках клинического материала гонококки видны как внутри, так и вне нейтрофилов. Создается впечатление, что большинство фагоцитированных нейтрофилами бактерий подверглось внутриклеточному лизису, однако это положение не бесспорно, поскольку имеются отдельные сведения о способности гонококков выживать и реплицировать в фагоцитах за счет нарушения регуляции образования каталазы и подавления активности эндоперекисей в фаголизосомах.Гематогенное распространение инфекции отмечают у 1% заболевших. В патогенезе диссеминирования гонококковой инфекции существенное значение имеет пол больного, обусловливающий характер развивающихся различных синдромов. Женщины более склонны к диссеминированным поражениям. В то же время заболевание у них часто протекает бессимптомно, а лечение не проводится. Женщины представляют основной резервуар инфекции.Гонококковая инфекция проявляется в виде гнойного воспаления слизистой оболочки мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз (бленнорея), других органов.
Различают следующие клинические формы гонококковой инфекции:
Инфекции нижних отделов мочеполового тракта:

цервицит;

уретрит (у мужчин и женщин);

абсцессы желез, прилегающих к влагалищу (преддверные и парауретральные железы).

Инфекции верхних отделов мочеполового тракта:

эндометрит;

эпидидимит;

воспалительные заболевания тазовых органов (воспаление фаллопиевых труб, яичника и тканей придатков).

Инфекции прочих органов и тканей:

проктит (ректальная гонорея);

фарингит;

бленнорея;

тазовый перитонит и перигепатит (синдром Фитц-Хью – Куртиса);

фарингеальная гонорея.

Диссеминированная гонококковая инфекция:

синдром дерматита-артрита-тендосиновиита (лихорадка, полиартрит, тендосиновиит и кожные поражения в виде геморрагических папул и пустул, вызванные иммунными комплексами или гонококками);

септический моноартикулярный артрит;

редко развивающиеся поражения (эндокардит с поражением клапанов и менингит).

Несмотря на то, что в настоящее время существует большое число лекарственных средств для лечения гонореи, своей актуальности эта инфекция не потеряла и по сей день. Растущий уровень заболеваемости гонореей (острой и хронической) ставит проблемы экономического и социального характера. Хронические формы паталогического процесса, развитию которых способствуют разнообразные факторы (нерациональное лечение, самолечение, смешанные мочеполовые инфекции и др.), вялое, стертое течение гонорейной инфекции (у 70 – 80% женщин и 40% мужчин), сопровождающееся многоочаговым поражением верхнего и нижнего отделов мочеполового тракта, бессимптомное носительство гонококка вызывают определенные трудности диагностики данного заболевания. В связи с этим большое значение для установления правильного диагноза и вовремя начатого квалифицированного лечения приобретают лабораторные методы исследования.Полимеразная цепная реакция обладает рядом особенностей, позволяющей ей занять достойное место среди других методов диагностики гонорейной инфекции, а в ряде случаев (хроническая инфекция, стертая клиническая картина, прием антибиотиков) может служить единственным инструментом, способным обнаружить Neisseria gonorrhoeae.Обнаружение гонококков в материале (моча, сперма, секрет предстательной железы, соскобы из урогенитального тракта, конъюнктивы глаза, мокрота, бронхо-альвеолярный лаваж и др.) с помощью ПЦР необходимо для диагностики гонококковой инфекции и контроля эффективности лечения.
Гонококк (Neisseria gonorrhoeae), определение ДНК
Качественное определение ДНК возбудителя гонореи методом ПЦР.
Аналитические показатели: для индикации ДНК N. gonorrhoeae в клинических об­разцах и идентификации в присутствии других непатогенных нейсерий и других мик­роорганизмов. Определяемый фрагмент — участки последовательности гена крипти-ческой плазмиды N. gonorrhoeae с применением двух пар праймеров. Первая пара праймеров позволяет проводить обнаружение как N. gonorrhoeae, так и некоторых не­патогенных нейсерий. Другая пара праймеров также позволяет проводить обнаруже­ние как N. gonorrhoeae так и других непатогенных нейссерий, не выявляемых первой парой праймеров. Таким образом, анализ на обнаружение N.gonorrhoeae считается положительным только в том случае, когда с помощью каждой пары праймеров уда­ётся получить утвердительный результат. Специфичность обнаружения — 99%. Чувствительность анализа — 100 копий ДНК-матрицы криптической плазмиды N. gon­orrhoeae в 5 мкл прошедшей обработку (выделение ДНК) пробы.
Показания к назначению анализа:

Хроническая инфекция.

Стертая клиническая картина.

Контроль эффективности терапии (не ранее чем через месяц после прие­ма антибактериальных препаратов).

Профилактические скрининговые исследова­ния (для исключения вероятности бессимптомного течения инфекции).