Суперовуляция и развитие эмбрионов

Проанализированы способность ооцитов человека к оплодотворению и последующее развитие эмбрионов в культуре в зависимости от реакции яичника на стимуляцию кломифенцитратом и человеческим менопаузальным гонадотропином с последующей индукцией овуляции хорионическим гонадотропином.Особенности оплодотворения ооцитов и развития эмбрионов в культуре в зависимости от реакции яичников на стимуляцию суперовуляции О.А. Воробьева, В.В. Потин, В.С. Корсак, А.А. Кирсанов, В.В. Козлов Международный центр репродуктивной медицины, НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт-Петербург; Чикагский институт репродуктивной генетики Проблемы репродукции, N5-1998, с.53-58 Проанализированы способность ооцитов человека к оплодотворению и последующее развитие эмбрионов в культуре в зависимости от реакции яичника на стимуляцию кломифенцитратом и человеческим менопаузальным гонадотропином с последующей индукцией овуляции хорионическим гонадотропином. По мере усиления ответа яичника на стимуляцию и повышения числа пунктированных фолликулов происходит постепенное снижение частоты оплодотворения ооцитов в культуре и повышение частоты формирования полиплоидных зигот. Определена нелинейная зависимость частоты оплодотворения, а также образования полиплоидных зигот от числа фолликулов. С усилением ответа яичника на стимуляцию наблюдается улучшение морфологических характеристик и увеличение числа бластомеров у эмбрионов.Ключевые слова: стимуляция суперовуляции, пункция фолликулов, частота оплодотворения, формирование зигот, эмбрион.  Одним из основных условий успешного лечения бесплодия методом оплодотворения ооцитов в культуре и последующего переноса эмбрионов в полость матки (in vitro fertilization — IVF, метод экстракорпорального оплодотворения — ЭКО) является оптимальная стимуляция процессов фолликулогенеза, суперовуляции и рецептивности эндометрия [1]. Ранее было показано, что ответ яичников на стимуляцию может зависеть как от возраста женщины, так и от наличия овариальной недостаточности [2, 3].  Данные литературы о влиянии ответа яичника на процессы оплодотворения и последующего развития достаточно противоречивы. По мере увеличения числа фолликулов в яичнике в ответ на стимуляцию наблюдали снижение частоты оплодотворения ооцитов [4]. В то же время другие авторы [5] (1996) отмечали повышение доли оплодотворенных ооцитов при увеличении числа пунктированных фолликулов.  В настоящей работе изучена зависимость между числом пунктированных фолликулов и такими показателями, как частота оплодотворения ооцитов, формирования диплоидных и полиплоидных зигот, а также развитием эмбрионов в культуре.Материал и методыПроанализированы исходы 1146 пункций фолликулов, в результате которых были получены ооциты у женщин, проходивших ЭКО в Центре ЭКО Научно-исследовательского института акушерства и гинекологии им.  Д.О. Отта РАМН. У всех больных показанием к проведению ЭКО явилось трубно-перитонеальное бесплодие вследствие непроходимости или отсутствия маточных труб. Возраст больных колебался от 19 до 46 лет и составлял в среднем 31,3 0,1 года. Для стимуляции суперовуляции использовали кломифенцитрат (клостилбегит) и человеческий менопаузальный гонадотропин (хумегон, пергонал). Для индукции овуляции вводили хорионический гонадотропин (ХГ) при достижении лидирующими фолликулами диаметра 17-18 мм.  В среднем у одной женщины было пунктировано 7,83 0,13 фолликула и при этом получено 5,63 0,09 ооцита. Ооциты отмывали и культивировали в среде Ham-F10 с альбумином человека в течение 6 ч. Для инсеминации вводили 100 000 сперматозоидов в 1 мл среды. Через 18 ч определяли число пронуклеусов в зиготах, при этом полиплоиды удаляли, а нормальные зиготы переносили в свежую среду. Через 24 ч с момента начала наблюдения за зиготой эмбрионы анализировали под микроскопом и определяли число бластомеров и степень выраженности процесса фрагментации бластомеров. Выделяли три основные типа эмбрионов — эмбрионы, имеющие бластомеры без фрагментации, а также эмбрионы с легкой и тяжелой степенью фрагментации цитоплазмы. Индекс фрагментации у эмбрионов первой группы был обозначен цифрой 3, у второй — цифрой 2 и у третьей- цифрой 1. Вторая оценка эмбрионов происходила перед переносом их в полость матки через 72 ч с момента выделения ооцитов из фолликулов. Для переноса отбирали четыре эмбриона с наибольшим числом бластомеров и наименьшей степенью фрагментации цитоплазмы. В среднем при оплодотворении в культуре было получено 3,52 0,68 эмбриона в расчете на одну пункцию и перенесено в полость матки 2,72 0,03 эмбриона.  Частоту оплодотворения вычисляли как отношение числа зигот к общему числу оплодотворенных клеток. Этот показатель в среднем составил 70,43 0,73%. Частоту дробления зигот определяли как отношение числа эмбрионов к общему числу полученных зигот. В среднем эта величина составила 94,38 0,41%. Частоту встречаемости полиплоидных зигот вычисляли по отношению числа полиплоидных зигот к общему числу ооцитов. Среднее значение этого показателя составило 5,11 0,32%.  Для анализа полученных результатов использовали методы вариационного, дисперсионного, корреляционного и регрессионного (линейного, а также множественного) анализа.РезультатыС помощью регрессионного метода проанализированы результаты 1146 пункций. Показано, что с увеличением числа пунктированных фолликулов наблюдалось достоверное снижение таких показателей, как частота оплодотворения (r =-0,21; р<0,0001) и развития зигот (r=-0,12; р<0,0001), и повышалась частота образования полиплоидных зигот в культуре (r=0,48; р<0,0001).С использованием регрессионного анализа нами установлено, что зависимость частоты оплодотворения от числа фолликулов может быть охарактеризована кривой 1 на рис. 1 и формулой:А = 83,64 — 1,42 х N, где А — частота оплодотворения ооцитов, %; N — число пунктированных фолликулов.Рис. 1. Зависимость частоты оплодотворения от числа пунктированных фолликулов.1 —   анализ результатов 1146 пункций; 2 — анализ результатов пункций у женщин в возрасте до 39 лет и нормальными показателями спермограммы мужа. Зависимость частоты оплодотворения в культуре от числа пунктированных фолликулов была изучена также в группе пациенток в возрасте от 20 до 39 лет с нормальными показателями спермограммы у мужа по результатам 759 пункций. В этой группе зависимость частоты оплодотворения от числа пунктированных фолликулов характеризуется кривой 2 на рис. 1 и формулой:А = 94,69 — 10,69 х lnN, где A — частота оплодотворения ооцитов, %, N — число пунктированных фолликулов (от 1 до 20).По мере увеличения числа пунктированных фолликулов происходило закономерное снижение частоты оплодотворения в культуре (табл. 1).Таблица 1. Влияние числа пунктированных фолликулов на частоту оплодотворения ооцитовПоказательЧисло фолликулов1-45-78-1011-15>15Результаты анализа у пациенток в возрасте 20-39 лет при нормоспермии мужаЧисло пункций18325020611344Частота оплодотворения, %81,36 1,791,2,3,473,06 1,411,5,667,55 1,712,564,65 1,893,666,65 3,114 Результаты анализа 1146 пункций Число пункций27437026716768 Частота оплодотворения, %80,03 1,551,2,3,470,52 1,261,5,667,08 1,51263,65 1,673,562,47 2,594,6 Примечание. 1-1, 2-2, 3-3, 4-4, 7-7 — p<0,001; 5-5, 6-6, 8-8, 9-9, 11-11 — p<0,01; 10-10 — p<0,05.Нами проанализирована взаимосвязь числа пунктированных фолликулов и частоты формирования полиплоидных зигот. Количественные данные, характеризующие частоту полиплоидии при различных значениях числа пунктированных фолликулов у нескольких групп пациенток, приведены в табл. 2. Максимальная частота образования полиплоидных зигот наблюдалась при пункции более 15 фолликулов. С уменьшением числа пунктированных фолликулов доля полиплоидных зигот постепенно снижалась.Таблица 2. Влияние числа пунктированных фолликулов на частоту образования полиплоидных зигот и развития диплоидных зиготПоказательЧисло фолликулов1-45-78-1011-15>15Результаты анализа у пациенток в возрасте 20-39 лет при нормоспермии мужаЧисло пункций18325020611344Частота полиплоидии, %4,92 1,014,83 0,636,34 0,775,68 0,817,00 1,40 Частота развития зигот, %97,16 1,081,2,394,81 0,772,492,95 1,07192,37 1,41390,70 1,844 Результаты анализа 1146 пункций Число пункций27437026716768 Частота полиплоидии, %4,64 0,8154,54 0,515,95 0,665,24 0,6656,52 1,08 Частота развития зигот, %96,87 0,876,794,90 0,668,993,44 0,91692,37 1,10890,53 1,637,9 Примечание. 1-1, 7-7 — p<0,001; 2-2, 3-3, 5-5, 6-6, 9-9 — p<0,01; 4-4, 8-8 — p<0,05.С помощью регрессионного анализа показано, что зависимость частоты полиплоидии от числа пунктированных фолликулов имеет нелинейный характер и может быть охарактеризована следующей формулой и графическим изображением (рис. 2):Р = 6,12 — 5,58 : N,где Р — частота образования полиплоидных зигот, %; N — число пунктированных фолликулов.Рис. 2. Зависимость частоты полиплоидии от количества полученных фолликулов.При усилении ответа яичника на стимуляцию наблюдается некоторое повышение частоты блокирования развития на стадии зиготы.  Максимальная (96,9%) частота развития зигот наблюдалась в группе со слабым ответом, а минимальная (90,5%) — в группе женщин с 15 фолликулами и более.Copyright © 2000-2002, РОО «Мир Науки и Культуры». ISSN 1684-9876

Комментариев пока нет.

Добавить комментарий


Беркегейм Михаил

About Беркегейм Михаил

Я родился 23 ноября 1945 года в Москве. Учился в школе 612. до 8 класса. Мама учитель химии. Папа инженер. Я очень увлекался химией и радиоэлектроникой. Из химии меня очень увлекала пиротехника. После взрыва нескольких помоек , я уже был на учете в детской комнате милиции. У меня была кличка Миша – химик. Из за этого после 8 класса дед отвел меня в 19 мед училище. Где меня не знали. Мой отчим был известный врач гинеколог. В 1968 году я поступил на вечерний факультет медицинского института. Мой отчим определил мою профессию. Но увлечение электроникой не прошло, и я получил вторую специальность по электронике. Когда я стал работать врачом гинекологом в медицинском центре «Брак и Семья» в 1980 году, я понял., что важнейшим моментом в лечении бесплодия является совмещение по времени секса и овуляции. Мне было известно, что овуляция может быть в любое время и несколько раз в месяц. И самое главное, что часто бывают все признаки овуляции. Но ее не происходит. Это называется псевдоовуляция. Меня посетила идея создать прибор надежно определяющий овуляцию. На это ушло около 20 лет. Две мои жены меня не поняли. Я мало времени уделял семье. Третья жена уже терпит 18 лет. В итоге прибор получился. Этот прибор помог вылечить бесплодие у очень многих женщин…