Изучали возможность замораживания спермы в открытой системе.
Одним из важных условий для успешного консервирования органов, тканей, клеток является исходное состояние будущего трансплантационного материалаГлавная страница Для специалистов Репродуктология Журнал «Проблемы репродукции» Номера журнала за 2001 год №2 — 2001
Автор: Журнал «Проблемы репродукции»
Дата публикации: 28.07.2002 07:03
Изучали возможность замораживания спермы в открытой системе.
Одним из важных условий для успешного консервирования органов, тканей, клеток является исходное состояние будущего трансплантационного материала. В частности, при оценке исходного состояния эякулята, подготавливаемого для низкотемпературного консервирования, необходимо обратить внимание на следующие параметры: подвижность спермиев, их число в образце, переживаемость в течение 1-2 ч, морфологические характеристики спермиев, а также определить содержание акрозина, a-фетоглобулина фертильности и криоустойчивость гамет. В связи с возрастанием числа патологии, влияющей на репродуктивную функцию мужчин (ионизирующее излучение, физико-химические факторы, стрессы, инфекционные и онкологические заболевания и пр.), в некоторых случаях возникает необходимость использования спермы донора. Цель настоящего исследования — изучить влияние сред замораживания и отогрева на морфокинетические показатели спермиев человека при криоконсервировании их простым и доступным методом.
Материал исследования
Материалом исследования служили эякуляты, полученные у 44 мужчин в возрасте до 40 лет после 3-4-дневной половой абстиненции. Пробы собирали в стерильные чашки Петри или бюксы. Разжижение образцов происходило при 37°С в течение 30-60 мин. Морфологические повреждения оценивали в мазках, окрашенных эозин-нигрозином. Оценку спермокинезисграммы проводили компьютерным методом (CASA) на микроскопе Оlimpus SH-40 c программным обеспечением «Видеотест-4». С целью защиты спермиев на этапе криоконсервирования к эякуляту добавляли одну из исследуемых криопротекторных сред:
1. глицерино-желточную среду (ГЦЖ);
2. глицерин (10%), цитрат натрия, сахарозу;
3. ГЦЖ после центрифугирования.
Были использованы две различные контролируемые скорости замораживания спермиев человека. В первой серии экспериментов замораживание проводили в открытой системе. Образцы, расфасованные в стерильные пластиковые апирогенные нетоксичные трубочки по 0,7-0,8 мл, герметично запаянные, помещали в ультратермостат и охлаждали со скоростью 1-2°С/мин до 10°С/мин, затем переносили в алюминиевый контейнер и продолжали охлаждение со скоростью 70°С/мин в течение 1 мин, после чего образцы погружали в жидкий азот. Во второй серии использовали замораживающую камеру УП-2 (СКБ Института проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины) с программным управлением. Замораживание проводили по 3-этапной программе с теми же скоростями замораживания. Трубочки маркировали и хранили в пластиковых контейнерах с завинчивающейся крышкой. Для размораживания использовали водяную баню 37°С/мин. После отогрева образцы спермы отмывали от криопротектора в среде Хенкса и проводили оценку жизнеспособности спермиев.
Результаты и обсуждение
Наилучшие результаты были получены при использовании среды 3 (51,7±3,0 млн/мл, группа a+b — 50%, при р
